水产养殖是世界上增长最快的产业之一。不过,由于体系的强化,水产养殖也受到更多的环境保护方面的关注和节制。磷是一种危险的水域污染物,过量的磷排放到清洁水域中会促使藻类和浮游生物生长,从而降低水溶的氧导致水污染(Miller等,1974;Beveridge,1984;Boyd,1990;Sugiura等,1999)。因此, 减少磷向水域的排放对水产养殖业的持续发展至关重要。用鳟鱼和鲑鱼做试验得出的数据表明,在典型的商业饲养中,日粮中的磷只有20%左右留在鱼体中(Ketola,1982;Philips和Beveridge,1986;Ackefors和Enell,1990;Holby和Hall,1991;Ketola和Harland,1993)。这意味着大约80%的日粮磷未被利用,而是以可溶态和粪便形式排放到水域中。现已了解,鱼排放磷的数量取决于鱼饲料中磷的含量和磷源的生物利用率。
鱼粉是水产饲料的一种主要原料。鱼粉含有相当多的磷和其他矿物质,而很多种鱼,包括鳟鱼和鲑鱼,对磷的利用率是较低的(NRC 1993;Sugiura 等,1998)。再者,鱼粉往往比大多数油粕如豆粕、谷物及其副产品,价格更高。因此,使用豆粕或谷物及其副产品替代鱼粉对于生产经济而有利于环保的水产饲料就更加重要了。但是,豆粕或谷物及其副产品中的总磷,大约2/3以植酸磷存在,而鱼对植酸磷的生物利用率是非常有限的(Ogino等,1979;NRC,1993;Raboy,1997)。Sugiura 等 (1998)报道,虹鳟鱼对豆粕中磷的利用率是22%;而Riche 和 Brown (1996)得出,虹鳟鱼对豆粕中的磷根本不能利用。由此可见测磷的重要性了。测定总磷和植酸磷的简化法分别列入附录D和附录E。
虹鳟鱼对豆粕中的磷的利用率实际上取决于豆粕来源和鱼的大小。程宗佳等 (2002d;2002e)发现,虹鳟鱼(体重223.4g)对豆粕中磷的利用率为63.2%。程宗佳等(2002d)进一步发现,挤压加工对豆粕中氨基酸的利用率无明显影响,但降低了磷的利用率(表1)。
提高豆粕中磷利用率的另一途经是在豆粕配制的动物饲料中使用植酸酶。植酸酶是专一水解植酸的酶。许多动物的消化道都有这种酶,但数量很少,不足以将饲料中的植酸明显分解(Bitar 和 Reinhold,1972)。在含有豆粕或谷物及其加工副产品的鱼饲料中使用植酸酶,不仅可降低鱼饲料的含磷量,还能减少向水域排放磷的数量。现在已有可添加到鱼和其他动物饲料中的商品植酸酶出售。不过植酸酶的效力可能各有不同,这取决于酶的来源和饲料配方。程宗佳等(2002d)在用干挤压全脂大豆制作的虹鳟鱼饲料中使用植酸酶,得出植酸酶的最佳剂量大致是400 FTU/kg饲料(表2)。
附录D:总磷的测定方法:
钒钼磷酸法(标准方法 15版,1981。APHA等):
将0.5g饲料(0.1g粪便)在550 °C 过夜灰化,称取灰分量;加 1mL浓缩HCl和 1mL浓缩HNO3,室温放置6h;以酚酞作指示剂,用NaOH中和样品溶液,定容至100mL,加HCl使溶液呈弱酸性。
试剂:溶液A:1.25g钼酸胺((NH4)6MO7O24·4H2O))/15mL 蒸馏水;
溶液B:0.0625g偏钒酸胺(NH4)VO3,加16.5mL浓缩HCl,冷却至室温;
将溶液A注入溶液B,混合,稀释至50mL。
操作规程:1mL 样品溶液(0.05~1.0mg P)+ 1mL钒酸盐钼酸盐试剂;
混合;读取在400~490nm的吸收率(10min~ 几d都稳定)
P浓度/(mg/kg) 读吸收率所在分光度/nm
1~5 400
2~10 420
4~18 470
总P(%)=溶液P浓度×稀释系数/所用样品量
附录E:植酸磷的测定方法 (Latta and Eskin,1980)
提取:
在50mL离心管中置入植物材料(1g),加入20mL 2.4%HCl(0.65N) (54mL HCl / L 蒸馏水),室温下摇动 3h;
离心,稀释,洗脱,显色:
取1.5mL样品溶液上层清液+0.2mL CHCl3 置MC管中,摇动5min,以12000rpm离心5min;
取0.5mL上清液(单一原料样品取0.5mL,混合饲料样品取1.0mL),用蒸馏水稀释至10mL;
先用15mL 0.7M NaCl 淋洗阴离子交换柱;后用大约15mL 蒸馏水再淋洗一遍,废弃洗脱液;
让10mL样品溶液通过0.5g(6cm柱内)阴离子交换柱(淋洗3份样品后应废弃离子交换树脂);用15mL 0.1M NaCl (5.85g NaCl/L蒸馏水)洗脱,回收洗脱液共25mL。(此洗脱液含有酸溶P,非植酸磷,可用其它测磷方法分析。)
换管,加 15mL 0.7M NaCl (40.95g NaCl/L蒸馏水) 洗脱,收集洗脱液(这一洗脱液中含植酸盐,采用以下方法分析);
取3mL洗脱液+1mL威德试剂(0.03% FeCl3·6H2O + 0.3% 磺基水杨酸);混合(溶液混浊时离心10min);读取在500nm的吸收率;
标准溶液:将标准试剂十二烷基植酸钠C6H6O24P6Na12(FW 923.8,纯度99%,含水12%)溶于0.7MNaCl溶液中制成浓度为5~40μg 植酸盐/mL 0.7MNaCl的标准溶液;1mL标准液+0.333mL威德试剂;混合,离心,读取在500nm的吸收率。
根据标准曲线得出洗脱液中植酸盐浓度,采用以下公式计算出样品中植酸磷含量。
计算:
植酸P(%)=溶液的植酸盐浓度×稀释系数×植酸盐含P量/样品重量
(全文完,参考文献56篇,略,可向作者函索。电话: (010)65051830;传真:(010)65052201。电子邮箱:jackcheng@asachzina.org)