免疫增强剂有机硒在生长猪上的应用研究

    硒是动物必需的微量元素之一，它与动物生长、发育和疾病发生有着密切的关系。硒以无机硒和有机硒形式存在，无机硒包括亚硒酸钠、硒酸钠、硒化钠、亚硒酸钙；有机硒包括硒酵母、硒代蛋氨酸、硒代胱氨酸等。有机硒的生物利用率高于无机硒，易于动物吸收利用，且有机硒毒性小，不会对人和环境造成不良影响[1]。硒与动物的免疫状况密切相关，被称为免疫促进剂[5]。硒能刺激免疫球蛋白及抗体的生成，提高机体体液免疫、细胞免疫和非特异免疫功能；缺硒可导致免疫能力低下，而补硒可提高机体免疫力。日前有机硒对促进生长猪免疫机能方面的研究在国内外报道较少，为寻求抗生素替代品，提高生长猪自身免疫力，以生产优质无公害猪肉而开展了本试验研究，旨在探讨有机硒对生长育肥猪免疫性能的影响，为今后指导生产提供参考。
1 试验材料及方法
1.1 试验地点及试验动物
    试验在河南省黄泛区农场第一种猪场进行。选择日龄相近、平均体重（30.0±0.5）kg的杜×长×大三元杂交小母猪20头，随机分为2个处理，每个处理10头，对照组为基础日粮组，处理组为基础日粮+有机硒（硒酵母0.02%）。
1.2 试验饲料及饲养管理 
    试验日粮营养水平采用NRC(1998)标准，饲料配方及营养水平指标见表1。试验期间试验猪饲养管理采用常规饲养管理模式，试验猪按常规饲养管理程序进行驱虫和免疫，采用干粉料日喂3次，自由采食、自由饮水，猪只发生病变或异常，要及时处理并记录猪只耳号。

1.3 试验检测指标及方法
1.3.1 血液生化指标
    总蛋白(TP)、球蛋白（GLB）、清蛋白（ALB）、计算血清球蛋白与白蛋白的比值（G/A）。
1.3.2 免疫指标
1.3.2.1 体液免疫指标
    使用牛血清白蛋白(BSA)试剂，采用酶联免疫吸附测定法，在酶联免疫自动读数仪492nm处读数，以1：50倍稀释光吸收值表示其抗体生成，测定血清中BSA抗体效价(OD值)。
1.3.2.2 细胞免疫指标
    迟发性过敏反应的测定，在生长猪左腿内侧皮下注射植物血球凝集素（PHA），右侧注射生理盐水，测定24h后腿皮褶厚度增厚差值。
1.4 试验处理
    在正式试验开始后的第7d，每个处理（对照组和处理组）选取3头体重相近的健康猪，每千克体重耳后肌肉注射牛血清白蛋白(BSA)1mg进行免疫，并在免疫后的0d(试验的第7d)、7d(试验第14d)和21d(试验第28d)用10ml真空采血管颈静脉采血5ml，3 000r/min离心15min，制备血清，-20℃冰箱保存备用。
    于试验正式开始后的第14d，对处理组剩余的猪只随机选取2头，进行皮肤过敏试验。其中在1头猪的左大腿内侧腹骨沟皮下注射0.5ml PHA（250μg/ml），右腿注射0.5ml生理盐水，圈圆圈标记。并分别于注射前和注射24h后用厚度计测定注射部位的皮褶厚度（3次读数，求平均值），再求出两腿皮褶增厚的差值，观察过敏反应程度。另外1头左腿注射1ml PHA（250μg/ml），右腿注射1ml生理盐水(其它处理同上1头猪)，测定24h后皮褶厚度增厚值。
2 试验结果与分析
2.1 血液生化指标
    分别于正式试验开始后的第7d、第14d、第28d前腔静脉采血制备血清，检测血清中的总蛋白、白蛋白，并计算血清球蛋白与白蛋白比值（G/A），试验结果见表2。

    血清球蛋白的主要作用是用以维持机体血管内渗透压的平衡和物质的运输。抗体是球蛋白重要的组成部分，炎症反应和应激状态下，血清球蛋白的含量增加。由表2可见，对照组与处理组猪血清总蛋白含量在试验1～28d时均有上升趋势；且对照组上升幅度大于处理组，但统计分析差异不显著（P<0.05）。在整个试验期间对照组血清中白蛋白含量上升，而且对照组血清中白蛋白含量高于处理组；处理组猪血清中白蛋白含量在试验的第14d时稍有下降，而在试验的第28d时上升。在整个试验期，处理组和对照组血清中G/A值均表现出先升高后降低的趋势，同时，在试验的第7d、第14d、第28d，处理组血清中G/A值均高于对照组，其中第7d和第14d时血清中G/A值统计分析差异达到显著水平（P<0.05）。本试验结果表明，在经过抗原牛血清白蛋白刺激后，机体的免疫系统被激活，更多的蛋白质用于抗体的合成，随着抗体产生量的提高，血液中的球蛋白含量随之增加，G/A值升高。表明有机硒具有提高生长猪体液免疫的作用。
2.2 牛血清白蛋白（BSA）抗体OD值
    前腔静脉采取BSA免疫后第0d、第7d、第21d的试验猪血清，检测BSA抗体OD值。对照组和处理组的牛血清白蛋白（BSA）抗体OD值结果见表3。

    分析发现，在BSA免疫前，猪血清中已经含有BSA抗体，且变异很大，而试验设计时认为BSA为一种异源蛋白抗原，猪血清中BSA抗体水平应该为零。估计这种抗体是由于许多疫苗如猪瘟疫苗中含有牛血清白蛋白成分(例如作为佐剂)造成的，而在本试验开始之前，该猪场已对试验猪群进行过两次猪瘟疫苗免疫。尽管如此，当以注射BSA抗体OD值为1时，用各时间点的OD值与之比较，则比值仍可出现较明显的规律性变化，即免疫后第7d时，BSA抗体的OD值均升高，而且，处理组与对照组相比差异达显著水平(P<0.05)。免疫后第21d时BSA抗体的OD值均下降，且处理组(有机硒组)下降幅度大于对照组，表明有机硒能被用来合成谷胱甘肽过氧化酶（ＧＳＨ-Ｐｘ）,以消除由于应激而产生的更多自由基(主要是通过降低氧化磷酸化的偶联作用，导致电子渗透的增加和超氧化基的过量产生)，具有降低免疫反应程度，避免机体长期处于高度应激状态，从而达到促进动物机体生长的作用。
2.3 皮褶厚度增加值
    分别于正式试验开始后的第7d、第14d、第28d每个处理随机选择1头猪，在猪的左腿内侧肌肉注射植物血球凝集素（PHA）0.5ml，右腿内侧注射0.5ml生理盐水；再另外分别选择1头猪，在猪的左腿内侧肌肉注射植物血球凝集素1.0ml，右腿内侧注射1.0ml生理盐水，并于24h后用厚度测量仪检测左、右腿皮褶厚度增加值，计算左右腿24h后皮褶厚度增厚差值，试验结果见表4。

    PHA是一种促有丝分裂原。动物皮下组织对PHA的反应状况是细胞免疫的一项指标[6-8]。免疫组织学分析，这种皮下反应的主要参与者为单核细胞和致敏的T淋巴细胞，其反应包括局部发炎感染并向皮下扩散，血管周围白细胞聚集成套状、水肿以及皮肤胶原蛋白隆起。由表4可见，试验组猪PHA注射后24h皮褶厚度增厚值大于对照组（在试验第14d时，0.5ml PHA注射剂量试验组猪24h后皮褶厚度增厚值小于对照组，这可能与个体差异有关），并且给试验猪注射1ml PHA皮褶厚度增厚差值大于注射0.5mlPHA剂量时皮褶增厚差值，表明给生长猪注射PHA 24h后皮褶厚度的增厚差值与注射PHA的剂量有关。同时，本试验结果显示，在试验的第14d时，皮褶增厚差值大于第7d时的皮褶增厚差值，而在试验的第28d时，皮褶增厚差值又下降，表明随日龄增加，生长猪机体免疫功能逐渐完善。本试验结果表明，在生长猪饲料中添加有机硒有提高生长猪细胞免疫的作用。
    综上所述，有机硒(硒酵母)有提高生长猪血液中G/A值的作用，提高牛血清白蛋白（BSA）免疫抗体OD值（免疫第7d时差异达显著水平，P<0.05）及植物血球凝集素（PHA）刺激皮褶厚度增加值的作用，即具有提高动物机体免疫性能的能力。

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